path-checktm hygıene pathogen patojen tespit sistemleri
Transkript
path-checktm hygıene pathogen patojen tespit sistemleri
PATH-CHECKTM HYGIENE PATHOGEN PATOJEN TESPİT SİSTEMLERİ Kontak petri ve swabların kullanıldığı yüzeyden örnek alma teknikleri için metodların ve test prosedürünün temel unsurları ISO 18593:2004(E)-Gıda ve Yem mikrobiyolojisi- standardında belirtilmiştir. Bu standardın dikkate alınması gereken temel unsurları şunlardır: 1. Tüm örnek yüzeyleri için nemli swab kullanılmalı 2. Swabı nemlediren solüsyon herhangi bir deterjanı veya hijyen ajanını nötralize etmeli 3. Swab nemlendirici solüsyon örnek içeriğini; örneğin bakteriyal yükü korumalı ve toplanan örneğin değerlendirilme aşamasına kadar sabit olmasını sağlamalı. 4. Örnek alınan alan 100 cm2’den büyük olmalı 5. Spesifik patojenlerin analizi için swablar uygun zenginleştirici ortama transfer edilir. 6. Zenginleştirme sonrasında hedef organizmanın gözlenmesi için örnek uygun katı besiyerine transfer edilir. 7. Hedef mikroorganizmanın var- yok testi yapılır. 8. Kontak petri metodu (Dipslide, RODAC petriler ve 3M PetrifilmTM ) patojenik mikroorganizmaların spesifik tespiti için kullanılmamalıdır. PROSEDÜR ADIM 1: Önceden nemli Path-Check Hijyen swabın kapağına dikkatlice açınız. ADIM 2: Standart örnek yüzeyinden (10 X 10 cm) swap döndürülerek yüzeyden örnekler toplayınız. Örnek toplama yüzeyi düzensiz ise standart örnekleme prosedürü oluşturulup sürekli aynı prosedür uygulanmalı. ADIM 3: Test yüzeyinden swab örneği alındıktan sonra Path-Check Hygiene Broth tüpünün kapağı aseptik koşullarda açılarak swab tüpün içerisine dikkatlice yerleştiriniz. Swap hemen Path-Check Hygiene Broth içerisine yerleştirilmez ise taşıyıcı tüpe aktarılarak serin bir yerde tutunuz. Path-Check Hygiene Broth tüpünü veya taşıyıcı tüpünü etiketleyiniz. Notlar: 1. Swab Path-Check Hygiene Broth tüpüne swab ucu tüpün kenarına gelecek şekilde 45°’lik açı ile yerleştiriniz. Swab bacağını aşağıya doğru bastırınız. Swab bacağı kırılma noktasından ( swab ucundan 45mm ) kırılacaktır. 2. Eğer swap hemen Path-Check Hygiene Broth içerisine yerleştirilmez ise, swab taşıyıcı tüpe aktarılarak serin bir yerde tutulmalı. Swab maximum sıcaklıkta 20 °C’de ancak 24 saat bekletilebilir. ADIM 4: İnoküle edilmiş örnek tüplerini uygun bir rack üzerine yerleştiriniz ve Koliform ve Salmonella için 35-37 °C’de 18-24 saat, Listeria için 28-30 °C’de 24-48 saat inkübe ediniz. Not: Listeria örneklerinin inkübasyonu 35-37 °C’de gerçekleştirilirse yanlış pozitif riski artabilmektedir. ADIM 5: Renk değişimleri gözleyip sonuçları kaydediniz. Pozitif sonuçlar 18 saatlik inkübasyon sonrasında gözlenebilir, fakat negatif sonuç için inkübasyon sürelerinin tamamlanmasını bekleyiniz (Koliform ve Salmonella için 24 saat, Listeria için 48 saat). ADIM 6: Yorum Sistem Pozitif Koliform Sarı Salmonella Siyah Listeria Siyah Tablo 1: Path-Check Hygiene Broth örneklerinin sonuç yorumu Negatif Mor Sarı/Mor Saman rengi ADIM 7: OPSİYONEL DOĞRULAMA PROSEDÜRÜ Olası pozitif testler organizmanın varlığını doğrulamak için uygun seçici agar petriye büyüme medyumundan bir damla ekim yapılır. Aşağıdaki agar medyumların kullanımı BAM ve USDA/FSIS gibi standart test metodlarına uygunluk sağlar. Sistem Koliform/ E.coli Medyum mENDO VRBA Salmonella XLD Bismuth Sulfide Listeria Oxford Palcam ALOA Tablo 2: Pozitif olarak tespit edilen örneklerin doğrulaması için uygun medyumlar Petri örnekleri 35-37 °C’de 24-48 saat inkübe edildikten sonra petride hedef koloni gözlemi yapılır. Şüpheli koloniler için ileri identifikasyon testleri ( mikroskobik testler ve Microgen GNA ID (MID-64), GNB ID (MID-65) ve Listeria ID (MID-67) gibi biyokimyasal testler ) uygulanmalıdır.