Deneysel Sıçan Modelinde Aşılama ile Adenovirüs 36`nın

Deneysel Sıçan Modelinde Aşılama ile Adenovirüs 36`nın

Deneysel sıçan modelinde aşılama ile
Adenovirüs 36’nın adipojenik etkisi azaltılabilir mi?
Tamer Şanlıdağ1, Seda Vatansever2, Sinem Akçalı1, Tuna Önal2, Candan Çiçek3,
Elçin Kal Çakmaklıoğulları4, Sevtap Gökalp2
Celal Bayar Üniversitesi Tıp Fakültesi Tıbbi Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı, Manisa
Celal Bayar Üniversitesi Tıp Fakültesi Histoloji-Embriyoloji Ana Bilim Dalı, Manisa
3
Ege Üniversitesi Tıp Fakültesi Tıbbi Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı, İzmir
4
Karabük Devlet Hastanesi, Tıbbi Mikrobiyoloji Laboratuvarı, Karabük
1
2
Giriş
“Adenovirüs serotip 5 ve adenovirüs serotip 36’nın Colo 320
hücre hattında adipojenik etkilerinin gösterilmesi”
Future Virology 2013; 8(6):617622.
“İnfektobezite;çocuklardaki obezitede adenovirüslerin rolü”
Journal of Investigative Medicine 2013 (yayına kabul
edildi)
Amaç
1. Adenovirüs serotip 36’nın (Adv36) adipojenik etkisinin
deneysel sıçan modelinde gösterilmesi,
2. Aşılama ile Adv36’nın adipojenik etkisinin azaltılması
Gereç ve Yöntemler-1
Virüs preparasyonu

Adv36 (ATCC, VR-1610)

Colo-320 hücre hattı

Virüs titrasyonu
Int J Obes Relat Metab Disord 2000;24(8):989-9
Gereç ve Yöntemler-2
Aşı hazırlama
Virüs inaktivasyonu:

UV ışınlama

250 mJ/cm2

UV sterilizer (Maris Sterilizer/Türkiye)
Arch Virol 2008; 153(11):2097-2102.
Gereç ve Yöntemler-3
Deney Hayvanları

Wistar Albino (4-5hf)

Erkek sıçan (n=30)

Etik Kurul Onayı
Gereç ve Yöntemler-4
Deney Hayvanları
1.
Kontrol grubu
2.
Aşılı grup
3.
İnfekte grup

Adv36 nötralizan antikor
Gereç ve Yöntemler-5
İnokülasyon

İntraperitoneal yol (200’er µl)

Kontrol grubu: Hücre kültür vasatı

İnfekte grup: Canlı Adv36

Aşılı grup: Önce inaktive virüs
5 gün sonra canlı Adv36
Arch Virol 2008; 153,(11):2097-2102.
Frontiers in Bioscience 2005; 10:1098-1105
Gereç ve Yöntemler-6
Deney hayvanları
 Ayrı odalar – standart koşullar
 Beslenme: su + yem
 12 hafta
 Sakrifikasyon
 Karaciğer ve adipoz dokular
Obesity 2006;14(11):1905-1913..
Gereç ve Yöntemler-7
KC ve Adipoz Dokular
 %10 formalin  48 saat (fiksasyon)
 Rutin parafin takip
 5 µm’lik kesitler
 Histokimyasal Analiz
 İmmünohistokimyasal Analiz
Gereç ve Yöntemler-8
KC ve Adipoz Dokular
 Histokimyasal Analiz

Hematoksilen Eozin Boyama

Oil Red Boyama
 İmmünohistokimyasal Analiz

Leptin Boyama (İndirekt immunoperoksidaz)
Future Virology 2013; 8(6):617-622
Gereç ve Yöntemler-9
Hematoksilen Eozin Boyama







Kesitlerin deparafinizasyonu (Ksilen)
Rehidratasyon (Dereceli alkol serileri)
Hematoksilen 5 dk
Akar suda yıkama 15 dk
%1 asit alkol 1-2 sn
Akar suda yıkama 15 dk
Eozin 3 dk
Gereç ve Yöntemler-10
Oil Red Boyama
 0.5 gr Oil Red/100 ml izopropil alkol
 3:2 oil red:distile su
 15 dk oda sıcaklığında boyama
Gereç ve Yöntemler-11
Leptin Boyama
Kesitlerin deparafinizasyonu (Ksilen)
Rehidratasyon (Dereceli alkol serileri)
% 3 lük hidrojen peroksit (H2O2) 5 dk
Tripsinizasyon 15 dk 37 0C
1 saat bloking
Anti-leptin (Invitrogen, USA) 1 gece inkübasyon
İkincil antikorlar (85-9043, Histostain Kit, Invitrogen)
– Biotinlayted IgG (30 dk)-Streptavidin (30 dk)
 Diaminobenzidine (DAB) 5 dk
 Mayer’s Hematoksilen ile artalan boyaması







Bulgular-1
Karaciğer-Hematoksilen Eozin
Zon 3
Zon 2 Zon 1
Zon 3
Zon 3
Zon 2 Zon 1
A
B
Zon 2 Zon 1
C
Resim 1. Hematoksilen Eozin Boyama sonrası kontrol (A), aşılı (B) ve infekte grup (C).
Orijinal büyütme: X400
Bulgular-2
Karaciğer-Leptin
A
B
C
Resim 2. Leptin boyama sonrasında kontrol grubu (A), aşılı grup (B) ve infekte grup
(F). Orijinal büyütme: X400
Bulgular-3
Adipoz dokular-Oil Red
A
B
Resim 3. Oil Red Boyama sonrası kontrol (A), aşılı (B) ve infekte grup (C)
Orijinal büyütme: X400
C
Bulgular-4
Adipoz dokular-Leptin
A
B
C
Resim 4. Leptin boyama sonrasında kontrol grubu (A), aşılı grup (B) ve infekte grup
(F). Orijinal büyütme: X400
Sonuçlar
 Deneysel hayvan modelinde Adv36;
 Karaciğer ve adipoz dokularda lipid birikimi
 Adv36 adipojenik etki
 İnaktive aşı: Adv36 bağlı obezitenin önlenmesinde
etkin bir yol
Dünyada ilk kez