Cryptococcus Türlerinin İdentifikasyonu
Transkript
Cryptococcus Türlerinin İdentifikasyonu
CRYPTOCOCCUS TÜRLERĠNĠN ĠDENTĠFĠKASYONU Süleyha HĠLMĠOĞLU POLAT Ege Üniversitesi Tıp Fakültesi Tıbbi Mikrobiyoloji Anabilim Dalı Cryptococcus türleri • ≈ 38 – 40 tür • İnsanda infeksiyon etkeni: - C. neoformans - C. laurentii - C. albidus - C. uniguttulatus - C. adeliensis - …………….. Cryptococcus neoformans • 4 serotip ? - C. neoformans var. neoformans Serotip A, D, AD - C. neoformans var. gattii Serotip B, C - C. neoformans var. grubii - Serotip A?? Mikrobiyolojik inceleme için gelen örnekler • • • • • • Beyin Omurilik Sıvısı (BOS) Balgam Kan İdrar Prostat sıvısı Doku BOS’ta Cryptococcus • Her BOS örneğinden mutlaka: - Mikroskobik inceleme yapılmalı * Direkt * Çini mürekkebi - Kriptokok antijeni aranmalı BOS’ta Cryptococcus Çini mürekkebi Kalkoflor beyazı BOS’ta Cryptococcus antijeni Olumlu Olumsuz • Deri kazıntı örneğinde çini mürekkebi ile kapsüllü maya blastosporları Kan kültürü şişesinden hazırlanan Gram preparasyonda Cryptococcus Kültür Mutlaka: Ġki Sabouraud-dekstroz agar (SDA), siklohekzimitsiz (26 ve 35 oC) Bir Staib agar (26 oC) Bir Kanlı agar’a ekim (35 oC) *** Örnek miktarı yeterli ise olabildiğince fazla SDA plağa ekim yapılması üretilme şansını artırır Kültür • Sabouraud-dekstroz agar (SDA) - 30-35ºC (≥ 37 oC’de daha yavaş) * C neoformans 37 oC’de ürer – patojenite faktörü!! - 24-48 saat - Krem renkli - Mükoid koloni → Ġlk kuşku !!! Kuşkulu maya kolonisi identifikasyonu Kuşkulu koloni Germ tüp testi Pozitif: Candida albicans Üre hidrolizi testi Olumsuz Olumlu Kuşkulu maya kolonisi identifikasyonu Üre hidrolizi testi olumsuz Pirinç unu Tween 80 agar Klamidospor Var Candida albicans Yok Psödohif Kuşkulu maya kolonisi identifikasyonu Psödohif Var Yok Gerçek hif Var Yok Blastospor Candida spp. Annelides Blastoschizomyces spp. Artrokonidyum Kuşkulu maya kolonisi identifikasyonu Artrokonidyum Var Gerçek hif Geotrichum spp. Yok Candida veya Cryptococcus dışı maya Kuşkulu maya kolonisi identifikasyonu Üre hidrolizi testi olumlu Pirinç unu Tween 80 agar Psödohif Var Artrokonidyum Yok Renk Kuşkulu maya kolonisi identifikasyonu Üre hidrolizi olumlu, pödohif var Artrokonidyum Var Blastosporlar Trichosporon spp. Yok Candida krusei, Candida lipolytica ve diğerleri Kuşkulu maya kolonisi identifikasyonu Üre hidrolizi testi olumlu, pödohif yok Renk Pembe Rhodotorula spp. Nitrat +, İnozitol – Beyaz Cryptococcus spp. Kuşkulu maya kolonisi identifikasyonu Üre hidrolizi testi olumlu, pödohif yok, beyaz koloni Cryptococcus spp. SDA’da (37ºC) ve Staib agarda (26ºC) üreme Staib agarda beyaz koloni Cryptococcus spp. Staib agarda kaverengi koloni Cryptococcus neoformans Nitrat -, İnozitol + Kuşkulu maya kolonisi identifikasyonu Cryptococcus neoformans Karbonhidrat asimilasyon Canavanine-glycine-bromthymol agar testleri (API 20C vaya AUX, RapID, YeastID, Üreme yok Üreme var Vitek, ..) C neoformans C neoformans var. neoformans var. gattii Serotiplendirme Kültürden direkt preparasyon • Tomurcuklanan maya hücreleri 5-15 μm Çini mürekkebi preparasyon • Kapsül • Tomurcuklanan maya hücresi Kapsül – doğada ince – dokuda çapı artıyor Kent L. Buchanan and Juneann W. Murphy Kültür • Staib agar (Bird Seed Agar veya Caffeic Acid Agar) - Beşinci gün - Kahverengi Staib agar (Fenol oksidaz testi) Kreatininli Kreatinsiz Kültür • Staib agarda doğadan izolasyon Üre hidrolizi • Christensen urea agar - 4 saat • Sıvı by. – 15 dk Pirinç unu Tween 80 agar • Yuvarlak, köşegenimsi blastosporlar • Hif yok • Nadiren psödohif Karbonhidrat asimilasyon testi C. neoformans - C. gattii ayrımı • Canavanine-glycine-bromthymol blue (CGB) agar • (C. gattii = ürer ve besiyerini 24 saat – 5 günde maviye dönüştürür) • (C. neoformans = üremez, besiyeri sarı) C. neoformans - C. Gattii ayrımı • Crypto-check serotiplendirme kiti C. neoformans - C. gattii ayrımı • • • • C. neoformans Yuvarlak blastospor Mükoit veya mat koloni Kanattlı dışkısı içeren toprakta • Staib agarda açık kahve (sütlü çikolata) rengi koloniler • CGB agarda üreyemez • • • • C. gattii Eliptik blastospor Koloniler daha mükoit Ökaliptus ağaçlarının bulunduğu toprakta • Staib agarda koyu kahve (bitter çikolata) rengi koloniler • CGB agarda ürer Güvercinli çocuk (Picasso)